疏水層析填料的方式運(yùn)用
更新時(shí)間:2023-07-05瀏覽:1061次
一、疏水層析是利用蛋白質(zhì)在高鹽條件下吸附在疏水層析介質(zhì)的疏水基團(tuán)上,降低鹽濃度時(shí),不同蛋白按疏水性從弱到強(qiáng)依次被洗脫,從而達(dá)到分離純化的目的。
二、與親和層析、離子交換層析相比,疏水層析在分離過程中,分離介質(zhì)與蛋白質(zhì)分子之間的相互作用力較弱,蛋白質(zhì)在層析分離中不易發(fā)生分子結(jié)構(gòu)的激烈改變,不易喪失活性,因此其應(yīng)用領(lǐng)域不斷擴(kuò)大,分離介質(zhì)的種類也日益增多。
三、方式:
(1)pH的篩選,可以提高產(chǎn)物收率,pH值升高會(huì)減弱疏水作用,一般選擇維持生物大分子的生物活性的中性條件(pH6~8)。
(2)疏水吸附作用隨著溫度的上升而增強(qiáng),樣品和純化系統(tǒng)的溫度需保持一致,溫度對疏水層析的影響非常大。
(3)一般為低鹽洗脫,或者需要更強(qiáng)的洗脫條件,可加入少量的有機(jī)溶劑或去垢劑。
四、疏水層析也稱疏水作用層析(hydrophobicinteractionchromatographyHIC)。蛋白質(zhì)表面一般有疏水與親水基團(tuán),疏水層析是利用蛋白質(zhì)表面某一部分具有疏水性,與帶有疏水性的載體在高鹽濃度時(shí)結(jié)合。在洗脫時(shí),將鹽濃度逐漸降低,因其疏水性不同而逐個(gè)地先后被洗脫而純化,可用于分離其它方法不易純化的蛋白質(zhì)。